有机溶剂中脂肪酶催化不对称水解反应。用脂肪酶催化水解外消旋化合物，通常需先酯化要拆分的外消旋醇或酸，再利用用脂肪酶的立体选择性进行水解，从而获取其中的一个对映体，而另一不反应或反应慢的对映体将仍以酯的形式存在，从而获得单一手性的醇或酸。
　　有机溶剂中脂肪酶催化不对称酯化反应。脂肪酶催化酯化反应时，需要尽可能在有机溶剂中进行。在有机溶剂中通过酯化反应拆分外消旋化合物时，用水量是获得较高光学纯度的产物的关键。通过选择适当的底物与脂肪酶，应用酯化反应可得到高光学活性的醇、酸或酯。
　　有机溶剂中脂肪酶催化不对称酯交换反应。在有机溶剂中用脂肪酶催化酯交换反应来进行外消旋化合物拆分已有研究。麻省理工学院的Klibanov等在有机溶剂中利用脂肪酶的酯交换反应拆分了外消旋醇，得到90%以上光学纯度的手性产物。由于酯交换反应中酰基供体的水解会消耗溶剂中的水，降低脂肪酶的柔性，故应严格控制有机相体系的水活度外线的作用从而降低对地球产生的屏蔽作用，并且还会产生大量的温室气体危害人类及动植物。